Les méthodes de détection des cellules tumorales circulantes (CTCs) sont variées et peuvent être classées en fonction de leur principe de fonctionnement. Voici un aperçu des principales techniques utilisées pour l'isolation, l'enrichissement et la caractérisation des CTCs :
1. Méthodes d'Isolation et d'Enrichissement
a. Séparation Immunomagnétique:
- CellSearch®: Utilise des ferrofluides couverts d'anticorps contre l'épithélial cell adhesion molecule (EpCAM) pour enrichir les CTCs. Les cellules marquées sont ensuite isolées à l'aide d'un champ magnétique.
- AdnaTest: Emploie des billes magnétiques couvertes d'anticorps contre EpCAM et la mucine 1 (MUC1) pour l'enrichissement des CTCs.
b. Séparation par Taille:
- Isolation by Size of Epithelial Tumor Cells (ISET): Les cellules sanguines sont filtrées à travers une membrane microporeuse qui retient les CTCs en raison de leur plus grande taille par rapport aux autres cellules sanguines.
- ScreenCell: Utilise une membrane microporeuse pour séparer les CTCs des autres composants sanguins en fonction de leur taille.
c. Séparation par Densité:
- Centrifugation sur Gradient de Densité: Utilise un gradient de densité pour séparer les cellules en fonction de leur densité. Les CTCs se concentrent dans la fraction du gradient correspondant à leur densité spécifique.
- CellBlock: Les cellules mononucléaires sont isolées après centrifugation, puis incluses dans un bloc pour une analyse histologique ultérieure.
d. Technologies Microfluidiques:
- Cell Enrichment and Extraction (CEE): Utilise des canaux microfluidiques fonctionnalisés avec des anticorps spécifiques pour capturer et enrichir les CTCs lorsqu'elles passent à travers le dispositif.
2. Méthodes de Caractérisation
a. Approches Immunologiques:
- Immunocytochimie: Utilise des anticorps spécifiques pour détecter des antigènes à la surface des CTCs. Les anticorps sont visualisés par des systèmes d'amplification/révélation.
- EPISPOT (Epithelial ImmunoSPOT): Détecte les protéines sécrétées par les CTCs sur une membrane de nitrocellulose pré-enduite d'anticorps spécifiques.
b. Approches Moléculaires:
- PCR Multiplex: Amplifie plusieurs séquences d'ADN cibles à partir des CTCs en utilisant des paires d'amorces spécifiques pour chaque séquence.
- RT-PCR (Reverse Transcription PCR): Après l'extraction de l'ARN, celui-ci est rétrotranscrit en ADN complémentaire, puis amplifié pour détecter des mutations spécifiques ou des niveaux d'expression génique.
- RT-qPCR (Quantitative Reverse Transcription PCR): Technique quantitative permettant de surveiller l'amplification de l'ADN en temps réel, offrant ainsi une mesure précise des niveaux d'expression génique des CTCs.
3. Méthodes Basées sur la Viabilité
- Viabilité des CTCs: Certaines techniques visent à isoler des CTCs viables pour des cultures ultérieures ou des tests fonctionnels. Cela permet d'étudier les CTCs en termes de comportement cellulaire, de réponse aux traitements, et de potentiel métastatique.
Conclusion
Les méthodes de détection des CTCs sont essentielles pour le diagnostic, le suivi et la gestion des cancers. Chaque méthode présente ses avantages et ses limitations, et le choix de la méthode dépend souvent des objectifs spécifiques de l'analyse et des caractéristiques de l'échantillon.